色谱知识一百问，掌握这些你就是高级工程师了！(下)

       61、一般正常使用一个C18柱能用多长时间?

　　答：柱寿命一般不按时间计算，按持续进样针数比较科学。一般正常使用维护，不超过pH和温度等范围，C18柱能达到500-2000针进样的寿命，视样品干净程度的不同而不同。

　　62、超高压快速高分离度色谱柱是不是未来液相色谱柱普及应用的一个发展趋势?

　　答：这是个大话题，今后使用会越来越多是肯定的，但是否会替代普通压力的液相还有争议。超高压也有使用上的不便，譬如容易堵，对设备硬件要求高等。

　　63、如果液相色谱谱图基线漂移很大是不是柱子的问题?波长越小的越大，270nm的还不怎么能看出来，230nm的就非常厉害了，有可能是什么原因造成的?

　　答：有可能是你的流动相的问题，230可能已经快到你流动相的截止波长了，当然紫外吸收强，基线漂移厉害。

　　64、我们有一台waters1525色谱仪，最近基线总是呈现波浪形很有规律，波长越小越明显，梯度洗脱时向上飘逸而且后一段时间呈现波浪形，很影响分析，我想问一下，是不是柱子的原因?

　　答：应该是流动相组成变引起吸收本底变化造成的，特别是在波长小的时候，乙腈的截止波长低于200nm，但甲醇和水相对比较高，在低波长时，甲醇和水有一定的本底吸收。梯度进行时，随着不同本底的组分含量的变化，基线也会有相应的波动。

　　65、我是做农药残留分析的，用的是UV2487检测器，想问一下，C18色谱柱用什么缓冲液比较好，我以前做三聚氰胺是用柠檬酸，辛烷磺酸钠，也用农药检测行不行?还有用HLB柱能不能去除蔬菜和水果中的杂质?

　　答：C18色谱柱用用磷酸盐，醋酸盐就比较好啊，离子对试剂不是个好东东，你要慎用。我们做三聚氰胺用三氯乙酸。

　　66、液相色谱柱一般使用寿命多长?不同类型的色谱柱是否寿命也不一样?液相色谱柱与气相的柱子有何区别呢?

　　答：液相色谱柱一般使用寿命多长!我有一根柱子，用了大约1年半左右，发现同样浓度的样品它的峰展宽了。说明柱效下降。但是不影响结果。因为峰面积还是接近。所以做色谱之前先做下柱子性能测试。第一次的图谱要保留。测试C18 RP柱，一般用到萘作为柱子的柱效判断。一般是18000片，对称性(usp)0.95-1.05间。液相色谱柱与气相的柱子有何区别呢?HPLC是走液体的。分正相，反相。反相为例。Si接着C18(键和相)，电镜下看起来像绒毛一样的。所以一般用甲醇，乙腈保护RP柱。这样它的绒毛呈舒展状。GC走气体的。固定相涂布固定液。

　　67、“水相”指的是什么?纯水?我们实验室的CN基柱保存在40%的乙腈里面，这个有不良后果吗?

　　答：水相就是纯水。CN基不适合保存在中等极性的溶剂中，除了可以低温保存在极性较大的纯水中外，还有可以保存在非极性溶剂如正己烷中。40%乙腈水，属于中等极性溶剂，短期过夜保存可能问题不大，长期保存不太好，后果就是可能会发生柱床坍塌。

　　68、CN基柱应该怎样维护才好呢?比如做完实验用什么流动相冲柱子、短期用什么溶剂保存、长期用什么溶剂保存等等。

　　答：CN可作正相柱，也可作反相柱用，除了保存溶剂有特殊要求外，其它维护办法和一般正相和反相柱没有多大区别。

　　69、色谱分析运行时，标样和样品的峰均随时间加宽

　　答：如果保留时间没有很大区别，只是加宽的峰拖尾，可能表明有活化点。如果加宽的峰是对称的，可能是由于正常的色谱柱“损耗和流失”。如果峰前伸，说明色谱柱过载。

　　70、色谱柱的接头，出口处用的是peek接头，请问都用peek接头不行么，为什么?

　　答：都用PEEK接头我认为都可以的，当然PEEK接头的质量要过关。有人认为PEEK接头不耐压，估计是针对品质不好的产品说的。

      71、排除色谱柱流失问题的最佳方法是什么?

　　答：诊断色谱柱是否存在流失问题的最佳方法是第一次在方法条件下安装色谱柱时，做一次空白色谱图，然后将最近的运行和空白运行色谱图对比。如果在空白运行中产生了很多峰，则色谱柱性能改变，这可能是由于载气中含有氧气，也可能是由于样品残留。如果有GC-MS，则低极性色谱柱的典型流失离子(例如DB/HP-1或5)质/荷比m/z将为207、73、281、355等，大多数为环硅氧烷。

　　72、我们的液相，为了节约成本我们自己填保护柱，用废的同型号柱子填。但填完以后做标样定量分析有所改变。请问其原因。

　　答：不建议自己填保护柱柱芯，填得不好的柱芯会影响分离效果，也会影响定量分析结果。你不知道废柱子里的填料是不是受了污染，另外你填的柱芯肯定没有厂商填得好，如果影响到峰形，峰面积积分结果有所改变是可能的。

　　73、请问怎么测柱效?柱子填料是SinoChrom ODS-BP 5um，规格4.6mm*200mm。

　　答：测定柱效不同公司不一样，一般柱子里面有检测报告，你按照报告里的方法做一遍就可以。

　　74、我用苯试了一下，峰性大大好，但是不知道理论塔板数，不知道怎么评价，感觉不大好，对称性不好，有点前延，柱子才用了四个月，是什么原因呢?是不是塌陷了呢?有什么补救的办法吗?

　　答：用了四个月峰形拖尾是很正常的，需要维护清洗一下色谱柱以清除引起拖尾的柱头污染。如果柱头塌陷，则不好办，从其它废柱子里取点填料填补塌陷，可以一试，但效果不一定好。色谱柱是耗材，测定进样针数如果达到500以上了，也算是物有所值，物尽其用了，报废了也不可惜。

　　75、流动相里之前有酸的，做完后单纯用乙腈冲洗，能把酸冲洗干净吗?之前他们是这样冲的，现在怀疑柱子塌陷了，会不会是长时间在酸性环境中造成的呢?

　　答：流动相里有酸，应该先用纯水或80：20的水/乙腈溶剂冲洗吧。如果一直在酸性环境，固定相容易流失，造成保留时间前移和其它色谱性能下降。

　　76、我前一段时间做三聚氰胺用C18色谱响应值很小，几乎无法检测，可是检测标准就是用的C18，后来我用RP18结果响应值很好，不知道什么原因，请问这两个柱子不都是反相色谱柱么?他俩之间有什么不同?

　　答：RP18就是C18吧，不过C18柱之间也有区别，测定三聚氰胺一般要用极性比较大的水性C18柱。

　　77、磺化交联的苯乙烯-二乙烯基共聚物为填充剂的色谱柱在储存过程未注意放在冰箱中，导致发霉后，柱效急剧下降，能何种方法将此色谱柱修复好?

　　答：聚合物柱子因为不怕酸碱，就直接用强酸强碱清洗。如果是H型，用1M硫酸冲洗;如果是Ca型，可以先用1M硫酸冲洗，再用EDTA钙盐转换回Ca型柱;如果是中性的聚合物反相柱，直接用1M的NaOH冲洗。

　　78、我有一个标准的稳定性检测分析方法，它是建立在某一供应商的碳18柱上，我知道有另一个厂家生产同样的碳18柱，但价钱是它的一半，如果我更换柱子会不会影响到分析方法?

　　答：要看这一分析方法的具体要求。如果方法中有说明“使用某一色谱柱或与其同样的柱子，”那么，就可以使用别的柱子来替换。但要注意，不能光看一个柱子标为碳18柱，或是其宣传等价于某某柱，就认为该柱适用于所有方法。必须要验证色谱柱的等价性。我们需要考查使用新柱子时，系统适应性是否可以通过验证。如果可以获得系统适用性测试中所要求的保留值，分离度以及其它参数等，就可以使用该柱。推荐使用系统适用性测试样品以及其它的典型样品来进行考查，以保证杂质和降解物在正确的保留时间出峰并给出正确的浓度响应;并且在新柱子上获得的分析结果要等价于在原柱子上的结果。

       81、请问下Hibar RT250-4这个柱子很特殊么?为什么很多药典中的药物分离都用它做柱子，因为才开始做药，不知道hibar的柱子特点是什么?

　　答：Hibar RT250-4是Merk的一个品牌，不是很了解。大概是共用柱头，可更换的柱管。

　　82、在碱性条件下硅胶溶解，又生成硅羟基的机理是什么?反应方程式如何写?

　　答：二氧化硅溶解的反应式是：SiO2+2OH-=Si032-+H2O或者表示成水解的形式：SiO2+H2O=Si032-+2H+这说明硅胶会在碱性条件下溶解而生成硅酸根。但我们这里说的是硅胶颗粒表面的部分溶解，含有键合固定相的硅胶原表面溶解脱落后，自然会生成新鲜的硅胶表面，而新鲜的硅胶表面结构一般都是含有硅羟基的。硅胶基本结构单元是Si-O-Si键，在OH-离子的作用下，Si-O键断裂，在表面形成Si-O-H硅羟基的结构单元。必须指出的是，在氨基柱的孔内，并没有单独加入OH-离子，偏碱小环境的形成是由于氨基易和水电离生成的氢阳离子结合造成的游离OH-离子的过剩。从第一个方程式角度解释，游离的OH-离子用完，硅胶就不再继续溶解;从第二个水解形式方程式角度解释：当硅胶水解生成的H+离子足够用来和氨基结合时，水解过程就会变慢或停止。

　　83、同样都是C18柱子，液相色谱柱和SPE他们之间有什么区别，能具体讲一下么?

　　答：HPLC柱子和SPE小柱的对比：

　　对于C18固定相，为了提高回收率，SPE里用的C18填料一般载碳量相对更高。

　　84、我从上面了解到RP18和C18的区别是极性强一些，能问一下他们在分析农药是可不可以通用?C18适用于那些农药的分析?我查材料看到苯醚甲环唑都是用C18分析的，可我用C18分析发现响应值很小，没法分析能帮忙分析一下原因么?

　　答：RP18和普通C18，肯定有其不同的适应性，农药种类这么多，可能大部分农药两者都能用，有些就不一定。你问的C18适用于哪些农药，应该从相关农药分析方面的书籍手册中可以查到具体什么农药用什么色谱条件合适，其中里面肯定有选择什么类型柱子，我这边没办法一一列举。液相色谱中，60%以上的分析物可以用C18柱，我想也应该有60%以上的农药可以用C18柱。如果手册或文献中查不到，你把农药作为普通分析物来对待，然后按照一般的色谱柱选择和方法建立原则来做就可以，选择决定因素应该也是农药分子的结构。苯醚甲环唑，应该含有极性基团，可以试试极性强的C18柱。

　　85、我在用乙腈作流动相时，只要那个乙腈比例稍高一点，比如20%，即使测量波长高于乙腈截止波长比较多，也会产生比较大的溶剂峰，这怎么回事?

　　答：如果出现溶剂峰，对你的分析结果没任何影响，那就让溶剂峰在那儿好了。或者你用规定的溶剂溶解提取样品后，再用流动相稀释一下样品，如果稀释后检测限能达到的话。

　　86、我在做一个模拟胃内容物中药物反应试验，需要动态测定某药品含量变化。分析时碰到一个棘手问题，进样量同样用20ul，用对照品进样时色谱峰形不错，进样品时却一直不能得到好的峰形。后来分析是模拟胃内容物样品的酸度过高的因素，可我通过稀释的方法让样品酸度和流动相接近，虽然峰形没问题了，却发现因稀释导致分析物在样品中含量下降，低于最低检测限了，如何是好呢?

　　答：稀释很方便，但灵敏度更高的检测器不容易找，不过还是有个简单的解决方案。当用流动相稀释样品时，只要稀释后样品中有机相含量比流动相中的有机相比例低10个百分点以上(如流动相中甲醇含量是40%，则样品中甲醇含量一定要低于30%)，样品流动会被色谱柱进口端延缓或阻挡，称为“柱上富集”。由于“柱上富集”作用的存在，这种情况下进行大体积样品进样，可避免样品溶剂组成和流动相一样时进样量过大产生的“峰展宽”。针对你提的这个实例，可用稀的NaOH溶液调节样品pH和流动相匹配，并将样品最终稀释一倍。将进样量提高一倍到40ul，就可达到最低检测限的要求。

　　87、峰形后拖尾是什么原因造成的?

　　答：[柱物理损坏] 色谱柱有物理损坏是造成峰形拖尾的根源。唯一的解决方法就是更换新柱。

　　[柱内填料污染] 流动相和样品中的杂质是色谱柱主要污染源。流动相所用的各种溶剂至少是分析纯，尽量使用色谱纯试剂。流动相所用的水最好是超纯水或全玻璃器皿双蒸水。用前先用0.45um溶剂微孔过滤(器)过滤，除去可能存在的微粒。流动相建议现用现配，对于含盐的溶液尤其注意长置会产生细菌或出现沉淀。此外还得保证储存流动相的容器清洁。

　　复杂样品可选用0.45um溶剂微孔过滤(器)或样品预处理柱对样品进行预处理，确保样品中不含微粒杂质。若样品不便处理，要使用保护柱。柱内填料污染时，可将柱头螺丝卸下，用专用工具挖出柱内前段被污染填料，再以相同的填料重新填入，修复。或以能溶解污染物的流动相按色谱柱使用的相反方向，冲洗色谱柱(约20至30倍柱体积，或视具体情况而定;另外，此时不能接检测器)，将污染物冲出色谱柱，再按色谱柱标明的使用方向使用。

　　[柱进口处有异物] 当断定是柱进口处有异物时，可将柱头螺丝卸下，取出滤帽并将其置于20%硝酸溶液中，用超声波清洗约20分钟，再置于超纯水中，并用超声波清洗约10分钟，重新装入色谱柱内即可。

　　[样品浓度过高致使柱超载] 样品在柱上超载能引起峰展宽，拖尾(或伸舌)。适当减小进样量或样品浓度(需要时，可提高检测器灵敏度)直至峰形和保留时间不再改变，便可消除这种不良影响。减小进样量还能改善其分离度。正常情况下，样品中每种化合物在150×4.6mm柱中进样量保持在3～50ug范围内，不会引起明显超载。

　　[样品溶剂不对] 选择合适的样品溶剂，以排除不必要的干扰。最好选用流动相溶解样品。

　　[柱外效应]即进样阀、色谱柱及检测器间的管路过长、直径过粗、管路接头不匹配、有死体积，是影响色谱柱柱效的主要因素之一。所以在可能的条件下，色谱柱的两端连接管路要尽可能短，连接管内径尽可能细小，切口务必平整光滑，尽可能的减小死体积，以防止因样品扩散造成不能反映色谱柱真实柱效等情况发生。

　　[缓冲不足或不合适] 在缓冲不好或离子强度过低的分离中，也会出现保留时间重现性差和峰形拖尾。增加缓冲浓度(与样品大小相匹配)能改善此情况。

　　[硅醇基团作用] 仔细分析色谱柱内填料表面性质可知：反相色谱柱填料的表面大约被键合相覆盖了一半，其余的就是未被键合的硅醇基团。所谓的保留是指样品分子与键合相相互作用的结果。但是，酸性或碱性化合物与硅胶表面残存的硅醇基团或金属杂质之间相互作用而引起双重保留机理，因此，发生了峰形拖尾。为了减小峰形拖尾，通常可在流动相加入25mM三乙胺(抑制剂)。三乙胺能与硅醇基团发生强烈的相互作用，从而降低或阻断样品分子与硅醇基团的作用，以保证保留机理正常进行，并大大缓解了峰形拖尾。使用长链的硅醇基抑制剂，虽起效较慢，但持续力较三乙胺长。因为抑制剂分子中除了胺基与硅醇基团发生极性作用外，大分子中非极性部分与固定相也会发生反相作用而产生保留现象。如果将抑制剂加至样品中，效果会显著。

　　[柱内金属污染] 柱内金属污染(Fe，Ni等)可引起某引些化合物峰形拖尾。金属可由填料本身带进，也可由腐蚀性流动相缓慢溶解柱进口的金属滤片，随流动相沉积到柱填料中。例如C18柱填料被金属污染后，造成酸性/碱性样品拖尾，可用碱洗/酸洗后再键合的填料，得到的峰是尖锐且对称的。

　　88、流动相与柱子如何才能做到匹配，达到最好的分离效果。目前我们实验室有购买好的色谱柱，可是对样品的分离效果不是很好。

　　答：不同填料的色谱柱都有自己的选择性，相同填料不同厂家以及相同厂家不同品牌之间的选择性都是不一样的，一般情况下根据物质的性质将分离的大方向如：正相分析或者反相分析，确定后，一般可以根据调节色谱条件能得到好的色谱峰形，这方面的资料论坛当中很多，但是也有些色谱柱不管怎么调整色谱条件都不行，表面这款色谱柱的选择性不适合该样品的选择。

　　89、我用的是C18柱，后面黑色的是我以前跑的图，前面是我现在跑的图形，完全一样的东西，只是流动相不是一批配的(流动相的成分没变)，中间柱子别人用过了，峰型怎么发生了这么大的变化啊?可能的原因是什么啊?是不是柱子出了问题啊?

　　答：从两个图对比很明显可以看出是柱效严重下降，且伴有肩峰。不同时间配的流动相，如果成分和pH没变的话，肯定不会造成这个结果。估计是别人用柱子过程中，造成了柱头塌陷、柱头污染以及固定相流失等严重问题，如样品太脏，流动相或样品pH太高或太低，都会造成这个结果。你可以试着用色谱柱清洗和再生的方法反冲维护一下，但不能保证一定能回到原来的效果。再生如果不行，考虑挖补柱头填料，实在不行，柱子也只能报废。建议柱子最好还是专门用于一种方法比较好，像你这种情况，都搞不清别人怎么用柱子的，分析解决问题就相当难。

　　90、柱子的柱效影响大吗?一般柱子的柱效规定是多少的呀!理论塔板数一般要达到多少呢?主要有那些因素影响它。

　　答：柱效是柱子性能好坏的一个重要体现指标。柱效会影响分离度，当然是峰形越尖锐，柱效越高，和其它峰越容易分开。另外，柱效高峰形尖锐，对峰面积的积分误差就小，甚至可以用峰高来定量。一般C18柱，在测定甲苯等不易拖尾的小分子中性不电离物质时，5um的填料，每米的柱效能达到80000以上的塔板数，就算合格吧。在实际分析物的测定时，一般药典有规定最低柱效是2000-3000，一般新柱子的柱效都高于这个数。但柱子在使用后，由于固定相流失等原因，柱效会逐步下降，当下降到不符合药典最低柱效要求，或者导致分离度不够时，色谱柱就算寿命到了。单从柱效逐步下降这个角度看，柱效高的色谱柱相对使用寿命更长。影响柱效的因素有粒径、粒径和孔径分布、固定相键合密度、柱外体积和温度等，柱子装填紧密、柱床均匀一致也对提高柱效有好处。这些影响因素中，很多是和生产厂商有关，你这边能做的是尽量减少柱外连接体积。

       91、流动相中加入四氢呋喃对柱子有损害吗?我现在分析一样品流动相中用到20%的四氢呋喃才能把峰分到基线。但柱子只能用一个星期分离效果就不好了。请问是四氢呋喃损坏了柱子吗?

　　答：四氢呋喃(THF)是反相色谱中洗脱能力极强的溶剂，比甲醇和乙腈都强很多。在流动相中加入THF能改善某些难分离的物质对的分离度。但THF不稳定，容易降解生成具有很强反应活性的过氧化物，能与分析物反应生成新化合物，导致拖尾、峰分裂和鬼峰产生。高反应活性的过氧化物还可以和填料固定相发生化学作用，THF对柱子有损伤这点是无疑的，而且这种损伤是随时间累积的。THF保质期一般规定是6个月，放得越久，里面产生的过氧化物含量越大，你应该避免使用生产日期已很久的THF溶剂，而且最好将THF冷藏、干燥和避光保存，使用前最好能检测一下过氧化物的含量。

　　92、在用液相色谱同时分离多种组分时，怎么通过条件色谱条件使各个峰达到比较理想的分离效果!

　　答：这是方法开发的大问题。方法开发建立，要做的就是：针对分析物和基体的情况不同，选择色谱柱类型和分析条件，包括流动相溶剂类型、组成比例、pH值、温度和流速等参数的确定。

　　93、样品过载问题，按药典检测方法检验一些药品有关物质时，都要注入高浓度的供试液，这样往往使得柱过载而峰变形，按老师的方法减小浓度和注入量均是不允许的，怎么处理这问题?

　　答：药典方法中注入高浓度供试液测定有关物质，提高注入浓度是为了把杂质峰的信号增强。有时候为了把杂质峰显现出来，主峰因过载有所变形，如在允许范围内，也能接受。但前提是杂质峰和样品主峰分开，如果因过载而使两峰没有得到需要的分离度，杂质峰信号再强也失去了意义。我认为药典规定的条件是允许在一定范围内进行调节的，因为药典没有规定具体使用色谱柱的品牌，而不同品牌的柱子，上样量是有差异的。对色谱条件微调，并取得到了很好的分析结果，如果规定不允许，那你首先要怀疑这个规定是否合理，或者是否对规定的理解有问题。

　　94、哪些原因会造成色谱峰变宽、峰高变低，有哪些解决办法?

　　答：确实是这样，如果其它色谱条件没有改变，柱效下降是导致峰变宽的主要原因。对于易电离的极性物质，如果流动相pH选择不合适，分析物既有中性分子态存在，又有离子态存在，峰也会变宽变矮。色谱柱使用后柱效逐步下降是正常现象，如突然降低则属异常。柱效下降原因有很多，但柱效快速下降则多半是使用不当，造成填料特性或柱床结构改变所致。如超过使用pH范围造成的固定相和硅胶基体的流失、柱床塌陷等;还有强保留物质吸附在填料表面，形成非特异性吸附层，完全改变了原有固定相的表面活性和分离性能，使柱效下降;另外进样时的压力脉冲，也会破坏柱床结构影响柱效。

　　95、我以前做苏丹红用的是安捷伦的SB-C18柱，峰形什么都很好，最近发现4个标样峰后都带有一个小峰，一开始以为是标样问题，后来换XDB-C18后标样又正常了。可是用SB-C18柱做其他用正常，不知怎么回事?还有，像这种C18柱如果压力过高能不能反冲，该如何冲洗?一般做兽残、农残什么的，而且感觉三聚氰胺做后压力更易增高，且容易引发进样器漏等问题，请问做完三聚氰胺需对系统做特殊清洗吗?

　　答：用SB柱，标样后带一小峰，而且是只对苏丹红标样测定时有，估计和苏丹红标样的测定方法和其它样品测定方法不同有关。最好能把谱图贴上来看看，是什么样的小峰?才能判断是溶剂峰还是杂质峰。XDB柱和SB柱是有区别的，XDB键合度高，封尾良好，反相保留能力强;而SB柱，未进行封尾，对极性物质选择性好。有可能你的苏丹红标样分解了，有极性杂质生成，SB柱能把杂质分开，而XDB柱不能。这两款柱子压力大了，可以反冲。有正常维护时的反冲冲洗和再生时的强溶剂冲洗两种，冲洗方法在在线讲座里也写了，你再回到本贴的前面看看就可以了。三聚氰胺和三乙胺类似，本身容易和硅醇基作用而吸附在填料表面，另外三聚氰胺测定的样品基体含蛋白类的强保留物质较多，容易污染色谱柱柱头引起填料间隙堵塞柱压升高，最好每次做完样后，都用甲醇或乙腈反向清洗维护一下。如有蛋白类的污染，也定时用本讲座中提到的清洗方法做一下维护。

       96、我是做农药残留分析的，不同的基质杂质含海量是不同的，我用C18分析时有可能一次就污染了，我用高流速，和反向冲洗都解决不了，是不是这根柱子就废了，有没有其他的办法?

　　答：高流速反向冲洗是对的，关键你用了什么溶剂冲洗呢?用原来的流动相冲洗肯定不管用，要不然就不会累积在柱子上了。你应该用流动相中的强溶剂B冲洗，如果不行，就需要启用再生的程序，当然再生时用的溶剂更强。100%甲醇---100%乙晴---75%乙晴/25%异丙醇---100%异丙醇---100%二氯甲烷---100%正己烷用每种溶剂冲洗至少10个柱体积，对于250mm×4.6mm的分析柱，合适的冲洗流速是1～2ml/min。最后用10柱体积的异丙醇过渡，然后回到原来的流动相体系。再生还不解决问题，最后一招就是挖补柱头填料，把柱头污染的填料挖掉，用干净填料填补进去。挖补填料，破坏原有柱床结构，挖补后柱效也不可能有新柱水平，或许能再维持一段时间，但不会长久。

　　97、还有溶剂中的金属过滤头生锈了，会有什么影响?会不会影响到柱子的寿命，金属离子和柱子有没有什么反应?

　　答：我觉得你就把锈当成颗粒物污染的一种，会导致拖尾、柱压上升等。溶解的金属离子一般在反相柱上没有什么保留能力，马上就会被冲出柱子，不会和固定相或者和硅胶基质反应。

　   98、保护柱和预柱的作用是不是一样的，如果不一样有什么区别么?保留时间漂移多少为可以接受的范围?

　　答：保护柱一般带填料，相当于一根缩短了的色谱柱(一般是1-2cm长度)，卡套里可更换的柱芯，柱管、筛板和填料都有。保护柱里的柱芯好像是在前面开路的扫雷部队，流动相和样品里如有什么损害柱子的污染物，保护柱就自己承受了下来。而预柱，现在一般指的就是接在进样器和色谱柱之前的在线过滤器。在线过滤器和保护柱的最大区别是不带填料，只有可更换的筛板。预柱只能保护色谱柱免受颗粒物质的污染，而不能阻挡溶解在流动相中的强保留物质。保留时间是液相色谱中一个很有用的诊断分离问题的工具。保留时间受流动相组成、温度、pH、流速、固定相流失和柱老化等很多因素的影响，如果所有这些参数保持不变，保留时间也保持恒定。但在实际操作中，不可能对每个色谱参数进行很完美的控制，如即便加了柱温箱，温度还是会有波动;流动相组成会因组分挥发性不同而改变。所以保留时间有上下0.02-0.05min的变动是非常正常的，对某些方法有0.1min上下变动也属正常。保留时间有大的变化，预示着系统和方法存在问题。流路里有气泡存在，泵阀有泄漏，会因流量降低而导致保留时间增加。梯度混合比例阀故障也是保留时间变化原因之一。

       99、随着进样室温度升高，对分析物分解有影响吗?

　　答：如果化合物热稳定性差，分析物分解可能会带来一些问题。这在制药工业中比较常见。如果药物或中间体热分解温度低于进样口温度，则分析结果中将出现特殊的峰或与目标分析物发生反应。

　　100、四氢呋喃对柱子有损伤吗?我有一流动相四氢呋喃要用20%才能使峰分离到基线。可是每根柱子只用一个星期后分离效果就不好了，请问是四氢呋喃的原因吗?

　　答：四氢呋喃(THF)是反相色谱中洗脱能力极强的溶剂，比甲醇和乙腈都强很多。在流动相中加入THF能改善某些难分离的物质对的分离度。但THF不稳定，容易降解生成具有很强反应活性的过氧化物，能与分析物反应生成新化合物，导致拖尾、峰分裂和鬼峰产生。高反应活性的过氧化物还可以和填料固定相发生化学作用，THF对柱子有损伤这点是无疑的，而且这种损伤是随时间累积的。THF保质期一般规定是6个月，放得越久，里面产生的过氧化物含量越大，你应该避免使用生产日期已很久的THF溶剂，而且最好将THF冷藏、干燥和避光保存，使用前最好能检测一下过氧化物的含量。