农杆菌介导的遗传转化共培养为什么没有见到菌落？

本人做菊花的遗传转化，所用菌种为EHA105，摇菌过程为：挑单菌落于5ml LB液体培养基中（含50Km+100Lif），过夜培养，然后从中取1ml菌液，转入50mlLB液体培养基中（不含抗生素）。在此过程中，菌液都可见明显变混。待菌液OD600=0.4-0.7时应用侵染转化。共培养培养基为不含任何抗生素的分化培养基。不知道为什么，一般共培养两天后都可在叶盘边缘看见明显的共杆菌菌落，而这次共培养4天，都看不见菌落，一般最多4天后，就会将叶盘转入富含200cef或者100cef的延迟培养基中。此后的过程中也没有菌落出现。不知是中间什么步奏做错了么，还是跟所用菌种和植物材料有关？